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酵母基因組DNA提取試劑盒

酵母基因組DNA提取試劑盒

酵母基因組   DNA  提取試劑盒說(shuō)明書(shū)  

貨號(hào)   ：    D1900

規(guī)格：    50T/ 100T

保存：  室溫 (15 ℃ -25 ℃ )  干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月， 2 ℃ -8 ℃ 保存時(shí)間更長(zhǎng)。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：  

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，提取酵母基因組 DNA 。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，能夠高效專一吸附 DNA ，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、  PCR 、文庫(kù)構(gòu)建、 Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：  

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。  

1 、取酵母細(xì)胞 ( 不超過(guò) 5×10 ⁷  ce l1 s) ， 12000rpm 離心 1min ，盡量吸除上清。

2 、酵母細(xì)胞壁的破除：向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer 。充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul β- 巰基乙醇，充分混勻。 30 ℃ 處理 1-2h ，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3 、 12000rpm 離心 lmin ，棄上清，收集沉淀。

4 、向沉淀中加入 200ul 溶液 A ，充分懸浮沉淀，向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A(10mg/ml) ，充分顛倒混勻，室溫放置 10min 。

5 、加入 20ul 的蛋白酶 K(10mg/ml) ，充分顛倒混勻。 65℃ 水浴消化 15-30min ，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化完全為止。

6 、加入 200ul 溶液 B ，再加入 200ul 無(wú)水乙醇，充分顛倒混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置 2min 。

7 、 12000rpm 離心 2min ，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8 、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液 ( 使用前請(qǐng)先檢查是否己加入無(wú)水乙醇 ) 。 12000rpm 離心 1min ，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

9 、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，  12000rpm 離心 l min ， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

10 、 12000rpm 離心 2min ，將吸附柱敞口置于室溫或 50 ℃ 溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切、 PCR 等。

11 、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65 ℃ 水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 5min ， 12000rpm 離心 l min 。

12 、離心所得洗脫液再加入吸附柱中， 12000rpm 離心 2 min ，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA 。

注意事項(xiàng)：  

1 、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。

2 、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65 ℃ 水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。

3 、如果實(shí)驗(yàn)中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。

4 、洗脫緩沖液的體積好不少于 50ul ，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右 ( 可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍 ) ，  pH 值低于 7. 0 會(huì)降低洗脫效率。 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在 -20 ℃ ，以防 DNA 降解。

5  、    DNA  濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組   DNA  片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。       回收得到的   DNA  片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。   DNA  應(yīng)在   OD ₂₆₀  處有顯著吸收峰，   OD ₂₆₀  值為   1.0  相當(dāng)于大約   50μg/ml  雙鏈   DNA  、   40μg/ml  單鏈   DNA  。   OD ₂₆₀ /0D ₂₈₀  比值應(yīng)為   1.7-1.9  ，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?  pH  值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。

相關(guān)產(chǎn)品：

相關(guān)文獻(xiàn)：

《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu，Xuewu Guo，Jun Lu，Xi Sun，F(xiàn)eng Li，Yefu Chen，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong，Guanglu Wang，Cuiying Zhang，Haigang Tan，Xi Sun，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844

公司簡(jiǎn)介：  

       北京索萊寶科技有限公司 始創(chuàng)于  2000 年， 是一家集 產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的大型高科技生物企業(yè)。公司總部位于北京，擁有 1200 平米研發(fā)生產(chǎn)中心，公司提供的產(chǎn)品近萬(wàn)種，超過(guò) 5000 種常備現(xiàn)貨，涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域，并不斷推陳新出擴(kuò)充種類，為用戶提供優(yōu)秀，專業(yè)的產(chǎn)品。    立足北京，輻射全國(guó)，隨著產(chǎn)品營(yíng)銷戰(zhàn)略的不斷延伸，我們將逐步發(fā)展成為專業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶一起，利用各自的資源優(yōu)勢(shì)和勇于進(jìn)取的敬業(yè)精神，為中國(guó)生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻(xiàn)。為了更好、更全面的發(fā)展，現(xiàn)公司正在誠(chéng)招各地代理商，歡迎垂詢并期待您的加入！  

北京索萊寶科技有限公司，供應(yīng)各種酶、輔酶、酶抑制劑相關(guān)產(chǎn)品以及其他生化試劑，實(shí)驗(yàn)、科研用品，參看如下產(chǎn)品類目，歡迎咨詢！  

產(chǎn)品類目：  

1.  細(xì)胞培養(yǎng)試劑   ,2.  細(xì)胞培養(yǎng)耗材   ,3.  蛋白質(zhì)提取   ,4.  蛋白質(zhì)純化   ,5.  蛋白質(zhì)定量   ,6.  蛋白質(zhì)電泳   ,7.  蛋白質(zhì)   Marker,8.Western blot,9.  免疫組化   ,10.  抗體   ,11.SABC  試劑盒   ,12.  基因組和質(zhì)粒提取試劑盒   ,13.  核酸提取相關(guān)試劑   ,14.DNA  電泳   ,15.DNA Marker,16.RNA  相關(guān)試劑   , 17.PCR,18.Southern blot,19.  基因工程   ,20.  生物培養(yǎng)   ,21.  堿基與核酸   ,22.  氨基酸   ,23.  多肽及蛋白質(zhì)   ,24.  酶   ,25.  輔酶   ,26.  酶抑制劑   ,27.  維生素   ,28.  抗生素   ,29.  染色劑   ,30.  糖與碳水化合物   ,31.  生物緩沖液   ,32.  植物生長(zhǎng)激素   ,33.  酸和鹽分離效   ,34.  胺   ,35.  層析介質(zhì)   ,36.  常用生化試劑   ,37.  其他生化試劑   ,38.  耗材   ,39.  標(biāo)準(zhǔn)品 ,40. 新增產(chǎn)品