肉桂酸-4-羥化酶（C4H）活性檢測試劑盒 紫外分光光度法
- 發(fā)布日期： 2019-05-23
- 更新日期： 2025-10-18
產品詳請
| 產地 |
北京
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| 品牌 |
Solarbio
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| 貨號 |
BC4080
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| 保存條件 |
2-8℃保存
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| 英文名稱 |
Cinnamate 4-hydroxylase (C4H) activity assay kit
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| CAS編號 |
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| 保質期 |
1年
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肉桂酸-4-羥化酶（C4H）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
產地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Cinnamate 4-hydroxylase (C4H) activity assay kit
產品商標：solarbio
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
貨號：BC4080
規(guī)格：50T/48S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；
參考價格：1060
庫存狀態(tài)：現貨
關鍵詞：
產品內容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存。臨用前加入3mL乙醇溶解備用。
試劑三：粉劑×2瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入3mL雙蒸水充分溶解待用?，F配現用。
產品說明：
C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，是催化桂皮酸形成咖啡豆、香豆酸的酶。C4H多存在于高等植物、酵母、菌類中，屬于細胞木質素合成途徑中間的關鍵酶。
C4H催化肉桂酸和NADPH生成4-香豆酸鹽和NADP，在340nm下測定NADPH的減少速率，即可反映C4H活性。
自備實驗用品及儀器：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理：
（1）組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。12000g， 4℃離心15分鐘，取上清，置冰上待測。
（2）細胞或微生物樣品的制備：先收集細胞或微生物樣品到離心管內，棄上清，按照每500萬細胞或微生物加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）。12000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟：
（1）紫外分光光度計預熱30min，波長調至340nm。蒸餾水調零。
（2）加樣表：在1mL石英比色皿中分別加入
試劑名稱（μL） 測定管
試劑一700
試劑二100
試劑三100
樣品100
充分混勻后立即測定10s時在340nm下的吸光度，記為A1，之后迅速將其放入37℃水浴或37℃培養(yǎng)箱中3min。然后迅速拿出擦凈后測定190s時的吸光度，記為A2。計算ΔA=A1-A2。
三、C4H活力計算：
1、按蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘減少1nmol NADPH的酶量定義為一個酶活性單位。
C4H（U/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×109×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T =535.91×ΔA÷Cpr。
2、按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘減少1nmol NADPH的酶量定義為一個酶活性單位。
C4H（U/g 鮮重）=[ΔA÷(ε×d) ×109×V反總]÷(W÷V提取×V樣)÷T =535.91×ΔA÷W。
3、按細胞或微生物個數計算：
單位的定義：每104個細胞或微生物在反應體系中每分鐘減少1nmol NADPH的酶量定義為一個酶活性單位。
C4H（U/104 cell）=[ΔA÷(ε×d) ×109×V反總]÷(500÷V提取×V樣)÷T =1.072×ΔA。
V反總：反應總體積，0.001L；
ε：NADPH的摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；
d：比色皿光徑，1cm；
V樣：加入的樣品體積，0.1mL；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
W：樣品質量，g；
V提?。禾崛∫后w積，1mL；
500：500萬個細胞；
T：反應時間，3min。
注意事項：
1、當ΔA大于0.4時，建議將樣品用提取液稀釋后測量；ΔA過小時，建議增加酶促反應時間（5min或10min）或增加加入的樣品體積來測定。
