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中性木聚糖酶(NEX)活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
產(chǎn)品商標：solarbio
注意：正式測定前務必取2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
貨號: BC2590
規(guī)格: 50T/24S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價格：460.00
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關鍵詞：木聚糖酶活性檢測試劑盒|NEX活性檢測試劑盒|中性木聚糖酶試劑盒|試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容：
緩沖液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體15mL×1 瓶，4℃避光保存
標準品：粉劑×1 支，4℃保存。10mg 木糖，臨用前加入667μL 蒸餾水配成100μmol/mL 的標品溶液，再稀釋50 倍即得2μmol/mL 的木糖標準溶液，備用。

產(chǎn)品說明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中，中性木聚糖酶(NEX)一般分離自最適生長pH 為6-8 的微生物。
NEX 在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm 處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm 吸光值增加速率，可計算NEX 活力。

試驗中所需的儀器和試劑：
低溫離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、細胞或微生物樣品發(fā)酵液的制備：
發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，置于冰上待測。
2、組織：
稱取約0.1g 組織，加入1mL 緩沖液，冰上充分研磨。8000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
3、酶干粉：
稱約1mg，加緩沖液1mL，震蕩充分溶解。
二、測定步驟：
1、可見分光光度計預熱30min 以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。
2、將上清液/酶溶液用蒸餾水稀釋十倍后置冰上待測。
3、操作表：
加入試劑                  對照管         測定管     標準管       空白管
樣品（μL）                 200            200
標準溶液（μL）                                       200
蒸餾水（μL）                                                       200
緩沖液（μL）               300            300        300           300
試劑一（μL）                -             200        200           200

              混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應30min，立即沸水浴10min 滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應體系)

試劑一（μL）               200 -
試劑二（μL）               300            300        300            300
              混勻，沸水浴顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進水改變了反應體系)，冰浴冷卻后盡快測量540nm 波長下的吸光值A 對照管、A 測定管、A 標準管、A 空白管，計算ΔA測定=A 測定管-A 對照管，ΔA 標準=A 標準管-A 空白管。

三、NEX 計算公式
1. 發(fā)酵液NEX 活力計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/mL）=[ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準) ]÷T=0.067×ΔA 測定÷ΔA 標準
2. 酶干粉NEX 活力計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下，每毫克酶每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/mg）=[ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準) ] ×V 樣品×10÷(V 樣品×W 酶÷V 提取)÷T=0.67×ΔA 測定÷ΔA 標準÷W 酶。
3. 組織中NEX 活力的計算：
（1）按樣品蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下，每mg 組織蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/mg prot）=[ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準) ] ×V 樣品×10÷(V 樣品×Cpr)÷T=0.67×ΔA 測定÷ΔA 標準÷Cpr。
（2）按樣品鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下，每g 組織每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/g 鮮重）=[ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準) ] ×V 樣品×10÷(V 樣品×W÷V 提取) ÷T=0.67×ΔA 測定÷ΔA 標準÷W。
C 標準：木糖標準溶液，2μmol/mL；
V 樣品：加入的樣品體積，0.2mL；
W 酶：酶干粉的質量，mg；
T：反應時間，30min；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
W：組織樣品鮮重，g；
V 提?。禾崛∫后w積，1mL；
10：樣品稀釋倍數(shù)。

注意事項：
1. 吸光度變化應該控制在0.01~1.5 之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變；也可以延長或者縮短反應時間。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質期3 個月，建議盡快使用。