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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | SEKM-0052 |
| 用途 | |
| 檢測(cè)方法 | 雙抗體夾心法 |
| CAS編號(hào) | |
| 檢測(cè)限 | 8 pg/ml |
| 數(shù)量 | 10 |
| 包裝規(guī)格 | |
| 標(biāo)記物 | CXCL16 |
| 純度 | % |
| 樣本 | Serum, plasma, Cell culture supernatant |
| 應(yīng)用 | Elisa實(shí)驗(yàn) |
小鼠 CXC 趨化因子配體 16 ELISA 試劑盒
產(chǎn)品編號(hào)：SEKM-0052
適用于小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本
背景介紹：
小鼠 cxc 16(Cxc Chemokine 16)是一種具有跨膜結(jié)構(gòu)域的 CxC 趨化因子,cx3cl1/fratalkine 和 cxcl 16 是超
家族中僅有的兩種跨膜趨化因子,小鼠 CXCL16 cDNA 編碼 246 氨基酸（AA）前體蛋白,推測(cè) 26 個(gè) AA 殘基
信號(hào)肽,88 個(gè) AA 殘基趨化因子結(jié)構(gòu)域,87 個(gè) AA 殘基粘樣間隔區(qū),22 個(gè) AA 殘基跨膜結(jié)構(gòu)域,23 個(gè) AA 殘基胞
質(zhì)尾部。小鼠和人 cxcl 16 在趨化因子結(jié)構(gòu)上有 49%的氨基酸同源性和 70%的相似性。小鼠 cxcl 16 是由淋
巴器官 T 細(xì)胞區(qū)的樹突狀細(xì)胞和脾紅髓細(xì)胞作為膜結(jié)合和可溶性形式產(chǎn)生的。根據(jù) Northern 印跡分析,其主
要在具有抗原提呈功能的細(xì)胞如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中表達(dá),也分布在肺、小腸和*組織。
檢測(cè)原理：
Solarbio (Solarbio ®) ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。將抗小鼠 CXCL16
單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本,標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠 CXCL16
會(huì)與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗小鼠 CXCL16 抗體,該抗體會(huì)與板子上包被抗體
捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠 CXCL16 發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉
親和素,生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物 TMB,若反應(yīng)孔中樣品存
在不同濃度的小鼠 CXCL16,則 HRP 會(huì)使無(wú)色 TMB 變成不同深淺（正相關(guān)）的藍(lán)色物質(zhì),加入終止液后反應(yīng)
孔會(huì)變成黃色；*,在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測(cè)定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD）,樣本中的小鼠濃度與
OD 成正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中小鼠的濃度。
原理圖：
注意事項(xiàng)：
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時(shí)請(qǐng)帶上手套并注意防護(hù)；在操作過(guò)程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請(qǐng)用大量清水清洗；檢測(cè)血液樣本及其它體液樣本時(shí)，請(qǐng)按國(guó)家生物
實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
自備實(shí)驗(yàn)器材（不提供，可代購(gòu)）
1． 酶標(biāo)儀（主波長(zhǎng) 450nm，參考波長(zhǎng) 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機(jī)或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管
樣本收集及儲(chǔ)存：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
將細(xì)胞培養(yǎng)基移至無(wú)菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入 2-8℃儲(chǔ)存），避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于
-20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入 2-8℃儲(chǔ)存），保存過(guò)程中如有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心，避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min ，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入 2-8℃儲(chǔ)存），避免反復(fù)凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測(cè)結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測(cè)濃度高
于標(biāo)準(zhǔn)品的*值，請(qǐng)將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測(cè)，建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。
試劑準(zhǔn)備：
1. 試劑回溫：首先在實(shí)驗(yàn)前 30 min 將試劑盒,待測(cè)樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請(qǐng)放入 37℃
溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
2. 配制洗滌液：預(yù)先計(jì)算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）1mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置15分鐘待其完全溶解后輕輕 混勻(濃度為1000pg/ml),按照以下濃度進(jìn)行2倍稀釋：250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.91pg/ml進(jìn) 行稀釋。250pg/ml作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的*點(diǎn)濃度,標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點(diǎn)（0pg/ml）。 復(fù)溶過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品原液（1000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20～ -80℃冰箱,具體如下圖。
4. 生物素化抗體工作液：預(yù)先計(jì)算好試驗(yàn)所需用量，用檢測(cè)稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍
應(yīng)用工作液（稀釋前充分混勻），請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。
5. 酶結(jié)合物工作液：按每次試驗(yàn)所需用量配制，用酶結(jié)合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應(yīng)用工作液（稀釋前離心），請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)使用。
6. 洗滌方法：
自動(dòng)洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒，洗板 5 次。
手工洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔，靜止 30 秒后甩 凈酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板 5 次。
結(jié)果判斷：
1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長(zhǎng)測(cè)定 OD 值。選擇雙波長(zhǎng)檢測(cè)，參考波長(zhǎng)為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長(zhǎng)檢測(cè)，請(qǐng) 用 450 nm 的 OD 測(cè)定值減去 630 nm 的 OD 測(cè)定值。
2.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均 OD 值：每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值
3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中CD30/TNFRSF8含量可通過(guò)對(duì)應(yīng)OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
4.若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。
參數(shù)表征：
數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線
