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小鼠腫瘤壞死因子-a ELISA試劑盒

產(chǎn)品編號#：SEKM0034

適用于小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本

樣本收集及儲存：

1. 1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：

將細(xì)胞培養(yǎng)基移至無菌離心管，在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。

1. 2. 血清樣本：

室溫血液自然凝固20 min后，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請?jiān)俅坞x心，避免反復(fù)凍融。

1. 3. 血漿樣本：

將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合20 min，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。

結(jié)果判斷：

1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長檢測，請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值。

2.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均OD值：每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值

3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中TNF-a含量可通過對應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。

參數(shù)表征：

1. 數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線

2. 靈敏度：

*可檢測小鼠TNF-a濃度達(dá)15pg/ml，

20個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度OD的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算相應(yīng)的可檢測濃度。

3. 特異性：

不與小鼠G-CSF 、GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、3、5、6、7、9等反應(yīng)，人的TNF-α、TNF sRI、TNF sRII等反應(yīng)

4. 重復(fù)性：

板內(nèi)，板間變異系數(shù)<10%

5. 回收率：

在選取的健康小鼠血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠TNF-a，計(jì)算回收率。

6. 線性稀釋：

分別在選取的4 份健康小鼠血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 TNF-a，在標(biāo)準(zhǔn)曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進(jìn)行稀釋，評估線性。