大家好，上次我們介紹了細胞培養(yǎng)需要的實驗室條件和實驗前準備工作及注意事項。這些知識和小技巧以及小細節(jié)都掌握了嗎？今天，小編帶大家學習細胞培養(yǎng)的基本操作步驟和操作要領，助您細胞培養(yǎng)實驗事半功倍。
細胞的復蘇與凍存
細胞復蘇
將細胞從液氮中取出后，放到37℃水浴鍋中進行快速解凍，邊解凍邊輕微搖晃。
確定凍存管中的細胞解凍完全后，放到水平離心機中離心，1000rpm離心2min。
小心吸掉上清，加入500μL培養(yǎng)基重懸細胞。
一般情況下，T75培養(yǎng)瓶中加10mL的培養(yǎng)基，將細胞加入到已加培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使細胞均勻分布，放到細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞凍存
從培養(yǎng)箱中取出細胞，觀察細胞的生長狀態(tài)是否良好，并觀察細胞的增殖數(shù)量。細胞要生長到一定密度再進行凍存。
懸浮細胞不用消化，將細胞輕輕吹散，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。不同的細胞要用不同的力度，不然會損傷細胞。
貼壁細胞要進行消化，消化完成后，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
培養(yǎng)基重懸細胞進行細胞計數(shù)，凍存密度在5×106-1×107/mL之間。
按照比例加入10%的DMSO，小心重懸細胞，細胞和DMSO充分混勻?；蛑苯佑眉毎麅龃嬉哼M行凍存。將細胞加入到凍存管中，每管1mL。
將凍存管放到凍存盒中進行梯度降溫，最后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
懸浮細胞培養(yǎng)
懸浮細胞有的結團生長，需要經(jīng)常觀察細胞狀態(tài)。
每次傳代都要將細胞團吹打成單個細胞，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
棄上清，重懸細胞。根據(jù)細胞生長速度取2×105-5×105個細胞進行傳代培養(yǎng)。
貼壁細胞培養(yǎng)
細胞復蘇
小心吸掉上清，加入2mL PBS，晃動培養(yǎng)瓶，洗掉多余培養(yǎng)基。
加入2mL 胰酶，放到培養(yǎng)箱中消化1-2min，輕拍培養(yǎng)瓶見細胞像沙粒樣散落，立即加入2mL含血清培養(yǎng)基終止消化，并用移液器吹打細胞，使細胞單個散落。吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
棄上清，重懸細胞。根據(jù)細胞生長速度取2×105-5×105個細胞進行傳代培養(yǎng)。
半懸?。ò胭N壁）細胞培養(yǎng)
半懸浮細胞就是不完全貼壁，上清中也有細胞。
需要將上清收集到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
重復貼壁細胞的操作，然后將上清中的細胞和消化下來的細胞重懸到一起再進行傳代培養(yǎng)。
索萊寶相關產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
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1.8ml凍存管 |
YA0901 |
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100孔塑料凍存盒 （適用于1.8-2ml凍存管） |
YA0460 |
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優(yōu)級胎牛血清 |
S9020 |
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10×PBS緩沖液 |
P1022 |
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RPMI Medium 1640（含雙抗） |
31800 |
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DMEM（低糖，含雙抗） |
31600 |
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DMEM無糖培養(yǎng)基 |
90113 |
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胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚紅 |
T1300 |
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胰蛋白酶消化液(0.25%) 不含EDTA和酚紅 |
T1350 |
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二甲基亞砜 DMSO (細胞培養(yǎng)級) |
D8371 |
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通用細胞凍存液 |
24800 |
